实时荧光定量PCR扩增曲线包括基线期,指数扩增期,线性扩增期和扩增平台期,标准的曲线应该呈典范的S型。不规则曲线可以凭证曲线的详细情形来剖析:1)曲线呈斜线上升缘故原由:热盖失灵或热盖没盖紧,导致控温禁绝、液体挥发。解决步伐:替换仪器热盖或将热盖盖紧。图1 曲线呈斜线上升2)扩增曲线分成两段(断裂)图2扩增曲线分成两段(断裂)缘故原由:基线的终点大于Ct值,通常是由于模板DNA浓度偏高,CT值< 15,而基线仍然取3-15,其中包括部分扩增信号,导致曲线被压下去。解决要领:减小基线终点,至Ct值前4个循环,重新剖析数据。3)直线扩增曲线图3 某些样本泛起直线扩增曲线缘故原由:探针部分降解解决步伐:建议替换试剂举行测试。4)曲线平台期下掉缘故原由:盖子没盖紧解决步伐:PCR反应管盖子盖上后,检查盖子是否盖紧。图4 曲线平台期下掉